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本试剂盒用来测定实体组织、细胞中的甘油浓度。甘油是甘油三酯的水解产物，与游离脂肪酸一样，甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标，但检测更加方便。


甘油三酯水解生成1分子甘油和3分子游离脂肪酸，称为脂肪分解。脂蛋白酯酶水解血中甘油三酯；胰脂酶水解食物中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶水解脂肪细胞中的甘油三酯。


在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化为3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢；在过氧化氢酶作用下生色底物转化为苯醌亚胺，光密度值与甘油浓度成正比。

组分	规格
裂解液	50mL
R1	16mL
R2	4mL
4mM甘油标准品	1mL

保存：4℃避光，有效期3个月。


本试剂盒可供100次微板测定或30次1mL比色杯测定。


酶标仪、可见光分光光度计（721、722型）、生化分析仪。
最佳工作波长550nm，如无此波长，建议优先选用570nm、530nm、490nm，比色杯光径1cm。

• 试剂混浊或空白管OD 550nm大于0.2时弃去。
  
• 维生素C＞0.18g/L、血红蛋白＞2g/L、胆红素＞0.25g/L、二硫苏糖醇、巯基乙醇、高浓度EDTA干扰检测。
  
• 红细胞糖酵解时合成磷酸甘油影响测定。

• 样本处理
  
  • 组织细胞裂解：
    
    • 细胞（包括分化的脂肪细胞）裂解：
      消化、离心收集细胞。或直接在培养皿内裂解。通常6孔板单孔约2×10⁶个细胞，75mm²瓶约1×10⁷细胞。按比例每1～2×10⁶细胞加100μL裂解液，混匀裂解。
      
    • 动物组织裂解：
      切记预先将新鲜组织称重后保存。组织冻存后再解冻称重会导致明显的测量误差。离心管精确称重，加入新鲜组织后再称重，二者相减（即减量称重法）计算组织重量（约50mg）。按比例每mg组织加入10μL裂解液，用0.5～1mL裂解液可保证有效的裂解。用电动高速匀浆器或手动玻璃匀浆器破碎组织。不推荐超声方法，因其不能完全和均匀破碎。应根据预实验调整组织细胞用量。
    
    
  • 裂解物处理
    
    • 取100～500μL裂解物转移到1.5mL离心管，进行下一步操作。余下的裂解物可用于BCA法蛋白定量试剂盒（货号：SNM078）进行蛋白定量或-20℃保存。
      
    • 70℃加热10分钟灭活脂肪酶，可能出现絮状沉淀。
      
    • 室温5000rpm离心5分钟，上层清液既可用于酶学测定。
• 工作溶液的配制
  按R1:R2= 4:1比例，即取4mL试剂R1与1mL试剂R2混合，现用现配，用多少配多少。
  注：谨防来源不明但容易发生的甘油污染，可来自操作者本人或标准品液体微粒溅射等。工作液变色弃去。
  
• 标准品稀释
  用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体，将4mM甘油标准品倍比稀释为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125μmol/L，通常4～6管即可，注意设置0浓度对照反应管。
  
• 甘油测定
  
  • 按下表加入各成分，待测样本体积10μL，多加可抑制反应。
    

    成分	96孔微板测定			1mL比色杯测定
    	空白管	标准管	测定管	空白管	标准管	测定管
    蒸馏水	10μL			35μL
    标准品		10μL			35μL
    样品			10μL			35μL
    工作溶液	190μL	190μL	190μL	665μL	665μL	665μL

    
    
  • 37℃或25℃反应10分钟。反应平衡后颜色在60分钟内稳定。
    
  • 先用蒸馏水空白管调零，然后测定各管OD值。
• 计算
  
  • 以各标准管OD值为y轴，标准品浓度为x轴，绘制标准曲线并计算甘油浓度。
    
  • 以每mg蛋白浓度或细胞数校正甘油三酯含量。

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